Antes de usar um tubo de centrífuga cônico, você deve garantir que o tubo possa suportar a pressão necessária durante a centrifugação. Para evitar confusões, é importante identificar o nível de enchimento e evitar o deslocamento da tampa durante o uso.
Para aplicações de cultura celular, são utilizados tubos de centrífuga cônicos estéreis. Este tipo de tubo possui um processo de fabricação de alta resistência e foi projetado para proporcionar maior estabilidade de temperatura. Para preparar um tubo de centrífuga cônico, siga as etapas descritas abaixo.
Adicione o volume correto de mídia gradiente de densidade a cada tubo de centrífuga cônico estéril. Os meios de gradiente de densidade estão disponíveis em uma variedade de meios, incluindo Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS) e PBS. Ambas são soluções salinas e não contêm cálcio ou magnésio. Contudo, o HBSS é adequado porque é menos ácido que o PBS.
Em seguida, dilua o sangue e o meio de separação inicial com WDR. Após a diluição, transfira a amostra para o tubo de centrífuga cônico estéril. Se o sangue não for diluído, o plasma aparecerá abaixo da camada de gradiente de densidade e poderá ser difícil de separar. Alternativamente, se todo o plasma for diluído, as PBMCs podem ser separadas do plasma.
Finalmente, junte os buffy coats e as bandas de fagos em um tubo de centrífuga cônico de 50 mL. Rotule o tubo com o PTID e as iniciais do técnico. Depois que a amostra tiver sido centrifugada novamente, remova as bandas de fagos e descarte o sobrenadante.
Para manter a integridade da amostra, recomenda-se seguir um protocolo para os reagentes, como o Método Underlay. Este método baseia-se na força gravitacional entre as duas camadas e cria agregados. Outros métodos, como sobreposição manual, também estão disponíveis.
Para minimizar a possibilidade de mistura, recomenda-se pipetar o tubo de sangue inicial sobre o meio de gradiente de densidade. O sangue e a solução do meio gradiente de densidade devem ser pipetados lenta e suavemente.
Se um tubo de centrífuga cônico não for capaz de suportar a pressão da amostra, você poderá usar um tubo de centrífuga recente. Certifique-se de que o tubo de centrífuga esteja estéril e possa suportar a pressão. É para manter o tubo de centrifugação em temperatura ambiente entre os usos. Alternativamente, o tubo de centrífuga pode ser armazenado em baixa temperatura. Durante o ciclo de congelamento-descongelamento, a centrífuga deve estar entre 2 e 8°C.
Quando o sangue estiver diluído, você pode adicionar o WDR para aumentar seu volume. Você também pode alíquotar a diluição nos tubos cônicos estéreis da centrífuga. Adicione 0,1 mL do WDR para cada 10 mL de sangue.
Além disso, um PTID deve ser anotado em todos os tubos de sangue recebidos. Usar um identificador PTID ajudará a minimizar qualquer contaminação cruzada. Além disso, você pode marcar cada PTID com marcadores de cores diferentes para evitar confusão.
Tubo de centrífuga Variante nº. | Modelo | FCR | Esterilização | Fundo | Especificação do pacote |
3030001 | 15ml | 12.000xg | Sim | Fundo do cone | 50/saco, 10 sacos/estojo |
3030002 | 15ml | 12.000xg | Sim | Fundo do cone | 50/rack de espuma, 10 racks/caixa |
3031001 | 50ml | 12.000xg | Sim | Fundo do cone | 25/saco, 20 sacos/estojo |
3031002 | 50ml | 12.000xg | Sim | Fundo do cone | 25/rack de espuma, 20 racks/caixa |